组织和细胞的固定方法

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　组织和细胞的固定方法

　　固定的目的是用人为的方法尽可能使组织细胞的形态结构和化学成分保持生活状态，防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。固定还能增加组织块硬度，使其更容易切片，使不同的结构更容易染色。

　　固定方法有物理固定和化学固定两类，物理固定可采用空气干燥（血涂片）、骤冷（在液氮中迅速冷冻）或微波固定等；化学固定有浸润法（immersionmethod）和灌流法（perfusionmethod）。灌流法适用于动物实验中对缺氧敏感的器官，如神经系统和胃肠等取材。

　　一、浸润法

　　浸润法是组织化学和免疫组织化学常用的固定方法，一次要处理许多组织样品时也多用此法。

　　预先需估计固定剂的用量，并在取材前配好固定液，分装于小容器内，在容器上标记组别和取材时间。容器内放人记录组织类型的纸条，以便包埋时辨认。固定液的用量应是样品的40倍，以保证组织充分固定。固定时间可根据所选固定液和组织类型而定。

　　若进行酶组织化学染色，应在4℃短时间固定，固定时间长会导致酶活性减弱，甚至消失。

　　二、灌流固定法

　　此法是经血管途径，将固定液灌注到欲固定的器官内，使生活的细胞在原位及时迅速固定，取下组织之后再浸入相同的固定液内继续固定。

　　灌流固定时大动物多采用输液方式，将固定液从一侧颈总动脉或股动脉输入，从另一侧切开静脉放血，输入固定液与放血同时进行。固定液的输人量因个体不同而异，即500―2000ml不等。

　　小动物多采用心脏主动脉灌流，如大鼠和小鼠，在吸人深度麻醉情况下，打开胸腔，纵向切开心包膜，并用纱线在动脉弓下打一松结，然后用静脉输液针从左心室向主动脉方向刺人，针尖刺人后，随即将纱线扎紧固定，勿使其移动，再将右心耳剪开放血。在灌注固定液前，先用含抗凝剂的37℃生理盐水灌流，冲洗血管内的血液，防止血液凝固阻塞血管。抗凝剂常用肝素，剂量为40mg/L冲洗液。肝脏颜色由鲜红变为浅白色时，即可灌流固定液，灌注速度为5～10ml/min，应在30分钟内结束灌注并取材，而后将组织浸入相同的固定液中1～3小时。灌流固定对组织结构和酶活性保存较好。