pIAβ8乳酸菌胞内质粒菌种

基本信息
名称：pIAβ8乳酸菌胞内质粒菌种
别称: p1Aβ8

启动子:	需要克隆进入
复制子:	pBR322
终止子:	rrnB T1，rrnB T2
质粒分类:	乳杆菌表达质粒
质粒大小:	7975bp
质粒标签:	LacZ
原核抗性:	Amp
真核抗性:	Chl
克隆菌株:	DH5α
培养条件:	37℃
表达宿主:	乳杆菌

质粒属性

质粒宿主：	乳酸菌
质粒用途：	蛋白表达
片段类型：
片段物种：
原核抗性：	氨苄青霉素
真核抗性：

质粒简介
         pIAβ8是一个乳杆菌表达质粒

质粒图谱


质粒序列
M13R测序序列：
        1 gtggcttgct gcctgcaggt cgactctaga ggaccccggg taccgagctc gaattcactg
       61 gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt
      121 gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct
      181 tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgccgggaat tattcaccac tccaagaatt
      241 ggagccaatc aattcttgcg gagaactgtg aatgcgcaaa ccaacccttg gcagaacata
      301 tccatcgcgt ccgccatctc cagcagccgc acgcggcgca tctcggctgt tttggcggat
      361 gagagaagat tttcagcctg atacagatta aatcagaacg cagaagcggt ctgataaaac
      421 agaatttgcc tggcggcagt agcgcggtgg tcccacctga ccccatgccg aactcagaag
      481 tgaaacgccg tagcgccgat ggtagtgtgg ggtctcccca tgcgagagta gggaactgcc
      541 aggcatcaaa taaaacgaaa ggctcagtcg aaagactggg cctttcgttt tatctgttgt
      601 ttgtcggtga acgctctcct gagtaggaca aatccgccgg gagcggattt gaacgttgcg
      661 aagcaacggc ccggagggtg gcgggcagga cgcccgccat aaactgccag gcatcaaatt
      721 aagcagaagg ccatcctgac ggatggcctt tttgcgtttc tacaaactct tcctgtcgtc
      781 atatctacaa gccatccccc cacagatacg gtaaactagc ctcgtttttg catcaggaaa
      841 gcagctgttt tggcggatga gagaagattt tcagcctgat acagattaaa tcagaacgca
      901 gaagcggtct gataaaacag aatttgcctg gcggcagtaa cgcggtggtc ccacctgacc
      961 ccatgccgaa ctcagaagtg aaacgccgta gcgccgatgg taatgtgggg tctccccatg
     1021 ccaaaatagg aaactgccag gcttcaaatt aaacgaaagg gtcagtcgaa aaaactgggc
     1081 ctttcggttt atctt

质粒菌株产品操作说明书
一、扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒菌株的抗性、感受态和培养温度。
         1、质粒干粉（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O去离子水溶解质粒；
              ②取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）
              ③加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；
              ④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）
              ⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；
（菌落过多则将质粒稀释后再转化。没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）
              ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
        2、甘油菌种（冰袋运输，存于-80℃，保质期90天，请务必划线挑单克隆培养）
              四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。
        3、穿刺菌种（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。
        4、菌落平板（冰袋运输，存于4℃，保质期7天）
              直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒（冰袋运输，存于-20℃，保质期90天）
              单独提取的液体质粒收到后可直接使用。
        6、滤纸质粒（常温运输，存于-20度，90天保质期，请务必转化挑单克隆培养，不要直接使用和测序）
              收到货后将滤纸画圈部分剪下放入EP管中，加100ul无菌水将滤纸浸湿并浸泡5min，吸取5ul质粒转化，离心全涂。

二、转化图片

P4916/pCMV-SPORT6-NEU4人源基因质粒

P4917/pCMV-SPORT6-FGFR1人源基因质粒

P4918/pCMV-SPORT6-ZNF41人源基因质粒

P4919/pCMV-SPORT6-ADGRE5人源基因质粒

P4920/pCMV-SPORT6-CRTAC1（389-1986bp）人源基因质粒

P4921/pCMV-SPORT6-RACK1人源基因质粒

P4922/pCMV-SPORT6-ALDH16A1人源基因质粒

P4923/pCMV-SPORT6-COASY（277-1695bp）人源基因质粒

P4924/pCMV-SPORT6-TMEM184A人源基因质粒

P4925/pCMV-SPORT6-PAK4人源基因质粒

P3648/pCMV-SPORT6-ZG16B人源基因质粒

P3649/pCMV-SPORT6-DNAJC19(1同义突变）人源基因质粒

P3650/pCMV-SPORT6-CCNDBP1人源基因质粒