Ect1/E6E7 人宫颈外口鳞状上皮细胞

                                            Ect1/E6E7人宫颈外口鳞状上皮细胞

                                           产品编号：CL-693h

一、细胞介绍

宫颈外Ect1/E6E7(ATCC CRL-2614 )和宫颈内End1/E6E7(ATCC CRL-2615)细胞系于1996年由DAnderson, RN Fichorova JG Rheinwald从一名43岁白人女性，因子宫内膜异位症行子宫切除术的绝经前妇女的正常上皮组织中建立。VK2/E6E7(ATCC CRL-2616细胞系于1996 年从一名接受前后阴道修复手术的绝经前妇女的正常阴道粘膜组织中建立。在聚凝胺存在下，通过用逆转录病毒载体LXSN-16E6E7转导使第3代的细胞永生化。在有 G418的培养基中选择克隆。细胞系可以为有效的、可重复的体外模型提供基础，用于研究宫颈阴道生理学和感染以及测试用于阴道内应用的药物。

二、细胞特性

来源：43岁女性宫颈阴道上皮

形态：上皮细胞样，贴壁生长

含量：>1x10⁶cells

规格：T25瓶x1（常温运输）/ 含有1mL细胞悬液的冻存管x2（干冰运输）

用途：本产品仅供实验室研究使用，不可用于动物或人类治疗或诊断用途

三、完全培养基及冻存液配制

1) 该细胞完全培养基为：角质形成细胞无血清培养基 (GIBCO-BRL 17005-042)，含 0.1 ng/ml 人重组 EGF、0.05 mg/ml 牛垂体提取物和额外的氯化钙 44.1 mg/L（最终浓度为 0.4 mM）

2) 培养环境：37℃，95% Air，5% CO₂

3) 冻存液：90%血清+10%DMSO，现用现配

四、收货注意事项

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液体溢出及细胞有污染，冻存细胞若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落，请拍照后及时与我们联系。

2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4) 对于贴壁生长的细胞：①静置后显微镜下观察细胞生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在运输过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。②若细胞汇合度未超过80%，可去除培养瓶中旧液（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中），加入新的完全培养基5mL，放入培养箱中继续培养（若培养瓶为密封瓶盖须拧松瓶盖）。③若细胞汇合度超过80%，请立即传代（若因运输振动脱落的细胞需要离心回收），首次传代，建议 1:2 传代（两个T25）。

细胞培养操作步骤

一、细胞复苏

1. 将含有1mL细胞悬液的冻存管快速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇晃加速溶解，直至冻存管中无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。

2. 将冻存管内容物加入到含有5mL完全培养基的离心管中混合均匀，1000rpm离心5min。

3. 弃去上清液，补加 4-6mL 完全培养基后吹匀，接种于T25培养瓶中，放入培养箱中培养过夜。

4. 第二天换液并检查细胞密度。

注意：在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和佩戴防护面罩，避免冻存管爆炸造成人员伤害。

二、细胞传代：细胞密度达80%-90%，即可进行传代

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化3-4min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后，加 5mL 以上含10%血清的完全培养基终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出至离心管中，1000rpm 离心 5-8min，弃去上清液，补加 1-2mL 完全培养基后吹匀。

4. 按5-6mL/瓶补加完全培养基，将细胞悬液按 1:2 ~ 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中，放入培养箱中培养。

三、细胞冻存

收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。步聚如下：

1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL。

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清，用细胞冻存液重悬细胞，按每1mL冻存液含1×10⁶~1×10⁷个活细胞/mL分配到一个冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞放入程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全柜内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。